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福建自考《分子生物学》第八章考试大纲

来源:福建自考网 发表时间:2020-05-19 15:10

考试大纲是备考自考的最主要的复习资料,考生可以根据考试大纲了解教材中的重点进行复习。福建自考网小编为考生整理了《分子生物学》第八章考试大纲,仅供参考!

第八章  基因工程及其在医药工业中的应用

一、学习目的与要求

本章阐述基因工程相关的酶学、载体以及基因工程的流程,重点是重要工具酶和载体、重组DNA的流程等。学习本章要求掌握基因工程相关的酶学、基因工程的载体、目的基因制备和常用分离方法、载体DNA与目的基因的连接、重组分子引入受体细胞、重组细胞的筛选鉴定、克隆基因在大肠杆菌的表达;熟悉克隆目的基因在酵母中表达、重组原核微生物生产药物;了解基因工程的诞生、原理和发展。

二、课程内容

第一节  基因工程的诞生、原理和发展
第二节  基因工程相关的酶学

1. 核酸限制性内切酶与 DNA 分子体外切割:宿主控制的限制与修饰现象――细菌自我保护机制;核酸内切酶的命名与类型;II型核酸限制性内切酶的基本特性
2. DNA 连接酶:大肠杆菌 DNA 连接酶;T4 DNA连接酶
3. 聚合酶:大肠杆菌 DNA 聚合酶I(E.coli pol I);Klenow 聚合酶;T4噬菌体DNA多聚酶;经修饰的 T7 噬菌体 DNA 聚合酶(测序酶);Taq DNA 聚合酶;逆转录酶
4. DNA 和 RNA 的修饰酶:末端脱氧核昔酸转移酶与同聚物加尾;T4 多核昔酸激酶与 DNA 分子 5’末端标记;碱性磷酸酶与 DNA 脱磷酸作用
5. 核酸酶:核酸酶S1 与 RNA 分子定位;BAL31核酸酶与确定限制位点;外切核酸酶 III;脱氧核糖核酸酶I;核糖核酸酶A
第三节  基因工程的载体
1. 大肠杆菌载体:克隆载体;穿梭载体;表达载体
2. 真核细胞载体:哺乳动物细胞的病毒载体;酵母载体;杆状病毒载体
第四节  目的基因制备和常用分离方法
1. 基因克隆和分离的基本步骤:选择含目的基因实验材料的原则;选择合适的载体制备目的 DNA 片段并克隆;选择合适的检测方法筛选目的基因
2. 人工合成: DNA 的化学合成过程;化学合成寡聚核昔酸可通过以下几种方法连接成完整的基因;化学合成寡聚核昔酸的应用;采用化学酶促相结合的办法;人工合成基因的基本程序;人工合成基因的局限性
3. 基因文库构建(限制性内切酶法):原核生物的目的基因直接分离;鸟枪法克隆基因;真核生物基因文库的建立
4. cDNA文库构建(逆转录法):构建理想的 cDNA 文库需要考虑的因素;构建 CDNA 文库的步骤
5. PCR法:基本原理;PCR 反应控制要点;PCR扩增的应用;PCR 分类
第五节  载体DNA与目的基因的连接
1. DNA分子间连接策略:粘性末端DNA片段连接;平末端DNA片段连接;粘平末端DNA片段间连接
2. 影响目的基因与载体之间连接效率的因素:DNA片段间的连接方式;目的基因与载体 DNA 的浓度和比例;连接温度与时间;其他因素
第六节  重组分子引入受体细胞
1. 重组 DNA 导入大肠杆菌:氯化钙转化法;转染法
2. 抗生素生物合成基因引人链霉菌载体宿主系统:抗生素生物合成基因引人的途径;链霉菌的宿主转化系统
3. 酵母菌转化:完整细胞转化法;原生质体转化法
4. 重组 DNA 导人哺乳动物细胞:显微注射法;DNA-磷酸钙转染法;DEAE 葡聚糖转染法;阳性脂质体及其介导的基因转染;电穿孔法;病毒感染法
第七节  重组体的鉴定和分析
1. 生物学方法:表型筛选法;噬菌斑形成筛选法;遗传互补法――利用遗传选择标记筛选哺乳动物转基因细胞;利用报告基因筛选植物转化细胞
2. 核酸分子杂交法:菌落原位杂交;DNA印迹分析;RNA印迹分析;斑点印迹杂交和狭线印迹杂交
3. 免疫分析筛选
4. 限制性内切酶图谱的鉴定
5. 双脱氧终止法测序(Sanger法)
第八节  克隆基因在大肠杆菌中表达策略
1. 真核基因在原核细胞中表达的特点
2. 影响外源基因在大肠杆菌中高效表达的因素:优化构建表达载体;影响转录水平的调控;影响翻译水平的因素;影响蛋白质水平的因素;其他因素
3. 真核基因在大肠杆菌中的表达类型:融合蛋白的表达;非融合蛋白的表达;蛋白分泌型表达
4. 表达蛋白提取、纯化和鉴定:提取;纯化;真核基因在大肠杆菌中表达产物的检测与鉴定
第九节  克隆目的基因在酵母中表达
1. 常用宿主
2. 酵母表达载体特点
3. 在酵母中高效表达外源基因的策略
4. 酵母表达系统的应用
第十节  重组原核微生物生产药物
1. 生产小分子药物:重组合成维生素C;重组合成抗生素
2. 生产蛋白类药物
3. 基因工程疫苗:乙肝病毒的结构;乙肝表面抗原的巴斯德毕赤酵母重组菌的构建

三、考核知识点

(一)基因工程的诞生、原理和发展
(二)基因工程相关的酶学
(三)基因工程的载体
(四)目的基因制备和常用分离方法
(五)载体DNA与目的基因的连接
(六)重组分子引入受体细胞
(七)重组体的鉴定和分析
(八)克隆基因在大肠杆菌中表达策略
(九)克隆目的基因在酵母中表达
(十)重组原核微生物生产药物

四、考核要求

(一)基因工程的诞生、原理和发展
(二)基因工程相关的酶学
识记:基因工程各种工具酶的生物学特性
领会:II型核酸限制性内切酶的基本特性
应用:基因工程中常用的工具酶有哪些?它们在基因工程中的用途为何?
(三)基因工程的载体
识记:载体的概念和种类
领会:大肠杆菌克隆载体、表达载体的结构
应用:试述基因工程常用载体的种类和用途。
(四)目的基因制备和常用分离方法
识记:基因克隆和分离的基本步骤;基因文库与cDNA文库的构建方法;PCR的原理。
领会:PCR 反应控制要点;PCR扩增的应用
应用:①目的基因制备方法有哪几种,它们各自的优缺点?②试述PCR的原理。
(五)载体DNA与目的基因的连接
识记:DNA分子间连接策略。
领会:影响目的基因与载体之间连接效率的因素。
(六)重组分子引入受体细胞
识记:转化、转导、转染的概念。
领会:重组分子引入受体细胞的常用方法。
(七)重组体的鉴定和分析
识记:重组体的鉴定的常用方法。
领会:双脱氧测序法的原理。
(八)克隆基因在大肠杆菌中表达策略
识记:真核基因在原核细胞中表达的特点。
领会:表达蛋白提取、纯化和鉴定的方法。
应用:影响外源基因在大肠杆菌中高效表达的因素有哪些?
(九)克隆目的基因在酵母中表达
识记:酵母表达载体特点。
领会:在酵母中高效表达外源基因的策略。
应用:酵母表达系统在基因工程中有哪些应用?
(十)重组原核微生物生产药物

 

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